病毒保存液成分和使用方法

疫情爆发已经持续一年之久，虽然已经研发出疫苗了，暂时遏制了疫情的蔓延，但是我们还是不能掉以轻心让病毒有机可乘，出门还是要戴口罩，对重点人群依旧要做到“应检尽检”，其他人群做到“愿检自检”。核酸检测和绿码已经成为我们正常出行的通行证。说到核酸检测就不得不提我们的一次性病毒采样管了。一次性病毒采样管是在采样管内灌入病毒保存液，采样管外贴上方便做标识的标签，这样既可以保护采样的工作人员也保护了我们采样的病毒不发生变异导致结果失效。

那病毒保存液成分含有哪些？使用方法又是什么？

很多人都觉得每个厂家的配方成分是不是都不一样甚至区别很大，其实保存液成分基本上都八九不离十，一般保存液成分含有Hank’s液基础、庆大霉素、真菌抗生素、BSA（V），冷冻保护剂，生物缓冲剂及氨基酸等。

其中Hank’s缓冲液构建的中性环境，有助于增加病毒的生存时间和感染稳定性；BSA（V）牛血清白蛋白作为蛋白质稳定剂，可在病毒的蛋白质外壳形成一种保护膜，使其不易分解，保证病毒的完整性；这样多种抗生素联合，具有抗细菌和抗真菌的作用。病毒保存液可用于临床流感、禽流感（如H7N9）、手足口病，麻疹等病毒标本及支原体、脲原体、衣原体等标本的采集及运送。

使用方法：

①、鼻拭子的采集：将拭子轻轻插入鼻道内鼻腭处，停留片刻后缓慢转动退出。将拭子浸入保存液里，弃去拭子尾部，拧紧螺旋盖。

②、咽拭子的采集：用拭子擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，就爱那个数字机浸入保存液。

③、直接在一级容器上用油性记号笔写明样本的种类、采样时间、编号、患者姓名。

④、将装有标本的病毒采样管放入生物安全袋里；每一袋装一份标本病毒采样管。同时也将有关信息填在标本送检表上，一起放在生物安全袋里。

⑤、将装有标本病毒采样管的生物安全袋放进专用运输病毒样本的密封箱内（或疫苗运输箱），放入冰排，然后以柔软的防震物质填充好，并密封，由专人运送，不得邮寄，最好是使用专用运送病毒标本的专用车。

⑥、采集的标本若不能尽快送检的话，要尽快放在-70℃以下保存，无-70℃条件的需在4℃的冰箱短时间暂存，并尽快联系递送标本。

⑦、注意流感病毒在-20℃~-40℃的温度条件下不稳定，故长期保存最好在-70℃温度下进行。采样人员需按有关规定做好个人防护。咽、鼻拭子最好在发病的头3天内进行采样。核酸样本保存条件苛刻，RNA极易裂解，4℃仅可存放24h，运输过程过长RNA就会出现提前被降解的现象，从而导致检测假阴性增多。而使用一次性病毒采样管保存病毒样本运输过程中，防止病毒采样后不能及时检测在送检过程中病毒被降解，避免因病毒在检测途中提前降解造成假阴性。

病毒采样管都有哪些类型？

用病毒采样管来收集标本时，常规标本未能立即用PCR检测出来。一般需要将拭子样本与标本一起搬运。病毒本身会迅速溶解在体外，影响随后的试验。运输时，必须添加病毒保存溶液。下面我们就一起来了解一下病毒采样管的灭活和非灭活两种类型！

为了达到不同的检测目的，有必要选择不同的病毒采样管。当时广泛使用的两种病毒采样管有各自的特点。为了满足不同的测试要求和不同的病毒测试实验室条件，一般的需求是对不同的病毒采样管进行采样。

灭活病毒采样管：主要是由核酸提取裂解液改良的病毒保存液。在采样期间含有高浓度的胍盐可以有效地灭活病毒，可以有效地防止操作者再次感染病毒。另外，可以在室温下保存较长的时间，节约病毒样本的保存和运输成本。

非灭活病毒采样管：主要基于改进的输送介质的病毒附着液保存溶液。失活的病毒采样管在体外维持病毒的活性、抗原和核酸的完整性，维持病毒的蛋白壳，不易分解，大大维持病毒样本的独创性。该记忆溶液除核酸提取和检测外，还可用于病毒培养、分离和抗原检测。但是，采样后需要长期保存，要求严格的低温。

可以看出需求根据条件选择不同的病毒采样管。但是，无论是灭活还是非灭活型的，采样前都必须对病毒采样管进行严格的灭活和灭菌处理，以保证采样管中没有其他微生物，需要注意病毒有可能分解。采样后的其他或其他影响将导致过失检测。拭子采样后，使用劣质的采样工具或者是保存溶液的，会影响后续测试的成果，甚至造成误诊的假阳性。

病毒保存液或者是样本保存液是采样管中添加的一种液体介质，我们在采样管标签中看经常会看到三种类型：UTM、VTM和MTM，那这几种保存液都有什么区别呢？

之所以出现三种名称有部分原因是因为不同地区使用习惯不同以及翻译问题造成的，甚至还有其他名称，当然他们的保存液成分有些也有一定的差别。

在国内一般用的比较多的是VTM，即viral transport  medium或者virus transport medium直译是病毒运输介质的意思，分为两种，灭活型标记为Inactivated，非灭活型标记为activated。

在国外部分地区，VTM和UTM都是指病毒保存液，UTM全称universal transport media，直译为通用运输介质，在病毒采样管中就是指的病毒保存液。这里的VTM和UTM通常都是指非灭活型保存液。有些厂家，VTM比UTM更有针对性，专门针对病毒样本的保存运输。

还有一种称为MTM，全称molecular transport media，直译为分子转运介质，对于新冠病毒样本检测这里的分子就是指的核酸RNA。MTM即是指灭活型病毒保存液，适用于传染病样本收集、储存和运输，是专门微客服标准病毒运输介质（VTM）和通用运输介质（UTM）（这些不会使微生物失活，也可能能抑制分子测试）的缺点而开发的。

MTM是专门设计来安全地灭活病原样品，同时保存和稳定释放的DNA和RNA。MTM中的裂解盐（盐酸胍、硫氰酸胍或其他）可以破坏病毒的保护性蛋白质外壳（衣壳），使病毒无法再感染，但同时保留了病毒核酸，即可用于分子诊断、测序和核酸检测。（有一些公司的灭活型也会标成UTM或者是VTM）

非灭活型病毒采样管虽不能灭活病毒，但它因为保存了病毒完整性状，除了用于核酸检测还能用于病毒表面抗原或抗体检测。其实病毒保存液的灭活型和非灭活型并没有说哪一种更好，华晨阳科技根据不同厂家产品以及检测环境的要求,灭活型和非灭活型量种保存液都可以提供。

病毒保存液除了RNA型外还有DNA型吗？

我们的病毒保存液通常分为两种类型，灭活型和非灭活型，不过这两者类型目前都是针对RNA病毒的，这主要是因为当今疫情下的冠状病毒都属于RNA病毒。病毒实际上是由DNA病毒和RNA病毒的，那么病毒保存液能适用于DNA病毒吗？

答案是不能直接用于DNA病毒的采样，经过调整则可以适用。不管是哪种类型的病毒保存液，最终目的都是保护病毒核酸在体外不会迅速降解，便于特定核酸序列扩增达到检测的目的。所以将RNA型病毒保存液中的Rnase酶抑制剂换成Dnase酶抑制剂即可，这样就能保证病毒DNA不会降解，从而达到检测的目的。

DNA和RNA都是控制一切生命活动的遗传物质，统称核酸，RNA病毒有着远超DNA病毒的突变型，在遗传表达上，DNA与RNA又扮演着怎样的角色呢？

DNA转录RNA，RNA翻译蛋白质

细胞间期，染色体不再受到纺锤体的牵引作用，开始松散，逐步去螺旋。这是DNA逐渐开始与外界接触，当接触到与其碱基序列配对的RNA时就会与之配对，这就是转录过程。RNA转录完成后，就会和hnRNP一起穿过核孔到细胞质中去。然后RNA会遇到核糖体，并开始翻译合成蛋白质。

DNA和RNA的归宿

内切酶将DNA从染色体上剪切下来，带上鸟苷酸的帽子离开细胞核到细胞液中，通过解旋酶由双链变成单链，通过DNA糖苷酸切除核苷酸T,再通过AP核酸内切酶（剪切掉DNA5’端脱嘌呤和脱嘧啶位点的蛋白质酶）、DNA聚合酶、连接酶进行短修复，这样的单链便有了RNA才有的核苷酸U,最终遇到DNase便被逐步水解。RNA则是脱离多聚核糖体后，利用在核糖体中翻译出的RNase直接把自己水解掉。DNA和RNA水解后的核苷酸都会进入细胞核开始下一个核酸合成过程。

其实DNA和RNA都是产生生命奇迹的基础物质，两者各司其职又非常相似，都参与生命遗传信息的表达，只拥有蛋白质和核酸结构的病毒也只是核酸不同，所以对应的病毒保存液也是非常相似的，区别只是抑制核酸水解的酶不一样。

病毒保存液是采样管中保存病毒样本的溶液，通常是在特定的实验室中使用的。最近有客户问我们测核酸检测的病毒保存液洒手上了要怎么办，让人哭笑不得的同时也给我们敲了个警钟。

不过值得庆幸的是，病毒保存液洒在手上基本是采样前的保存液，是不含病毒样本的。因为如果是对已采集的病毒样本的保存液操作时，是需要在专门的实验室有专门的技术人员操作的，由于提前穿好了防护服防护手套护目镜等装备，是不会让保存液接触到皮肤的。

但是在病毒保存液的分装、灌装、化验等过程中，有些单位是不需要穿戴全套防护装备的，的确是有可能接触到皮肤。这种情况下保存液中并不含病毒样本，其实也不必过于担心。不过病毒保存液毕竟不是一般的水溶液，还是需要在使用时多加注意的。

病毒保存液接触皮肤是否会造成影响取决于保存液中的成分。例如灭活型病毒保存液中主要是高浓度的裂解盐（如盐酸胍等）、EDTA、Tris缓冲液、RNase抑制剂；灭活型主要含有Hank’s液基础、抗生素、BSA（V）、HEPES缓冲剂等。这些成分直接接触皮肤立即用清水冲干净，然后用洗手液洗净即可，并不会造成中毒的。

这段时间由于病毒采样管、样品保存液、采样鼻咽拭子等产品贸易量比较大，仓库货中转过程可能会出现意外，造成保存液漏液的问题。虽然说这是并不含有毒性的液体，但是华晨阳科技还是再次提醒大家，在进行搬运、分装，采样等操作时一定要小心，戴好手套、护目镜等防护用具。

病毒采样管主要应用：

用于新式冠状病毒、流感病毒、禽流感、手足口病毒、麻疹等病毒标本以及支原体、脲原体、衣原体标本的收集及运送。病毒及相关样本的冷藏状态下的48小时内保存与运输。病毒及相关样本的-80℃环境或液氮环境中的长期保存。

病毒采样管采样拭子套装：

病毒采样管植绒拭子有助于新冠病毒的采样和开释，优于传统的棉拭子。强烈建议运用植绒拭子进行采样，可以提升新冠病毒核酸检测的阳性率。

标本采样部位：很多专家从实践工作中总结出的经验认为，下呼吸道采样的痰、肺泡灌洗液标本阳性率高于上呼吸道的口、鼻咽拭子采样的标本，但下呼吸道的痰、肺泡灌洗液标本采样难度大、易引起患者喷射导致采样操作者感染风险大，一般情况不建议使用。

为了提高检测阳性率，建议采样同一病人多部位标本，兼并进行检测。比如，用口咽拭子、鼻咽拭子一起采集标本，然后放到同一采样管中进行送检。对于有消化问题的疑似患者，可以用采样粪便或者是肛拭子进行检测

病毒采样管采样方法：

采样时，让患者张大嘴巴并发出“啊~”的声音后，将拭子从纸塑袋里取出，擦拭患者后咽部位或扁桃体两侧。

如果患者反应比较大时，应先停止采样，为避免采样时呕吐，应先提醒患者在做咽拭子采样前两个小时不要进食。医护人员采样动作应该轻柔。

标本采样后应该及时送到实验室，尽快完成检测。标本在常温条件下放置时间过长也有可能造成假阴性。